Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出新现口内自身抗基底到出新现1型式肝炎病理疼痛的重大突破率在成年人时期就有很好的叙述，多个口内自身抗基底中性的成年人里面有70%在血清匹配后10年内患上肝炎，而随访15年的成年人这一%-降低到84%。相对来说之下，占病理1型式肝炎一半以上的型式1型式肝炎的发病的系统还很难得不到充分的深入研究。

越来越多的人开始运用于分期系统来假定1型式肝炎的重大突破：个基底在出新现多种口内自身抗基底时转入第1阶段，出新现血糖异常时转入第2阶段，出新现疼痛时转入第3阶段。一些多发口内自身抗基底中性的个基底，在1期和2期，重大突破较慢速，并发展为发病的1型式肝炎。我们早先叙述了除此以外在首次样品到多种口内自身抗基底抽取后多于10年无肝炎的较快速重大突破者，这组成员病人人数少，但基本特征并不指明。随后，我们发现口内自身选择性选择性CD8+T巨噬细胞中间体将在重大突破快速速的病人里面基本不发挥作用，但在近期发病和起因于的肝炎病人里面很容易样品到。这可能确实，与重大突破病人相对来说，这些病人神经性中间体将的调节增强。

早期深入研究确实，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但肝炎病人发挥作用一些功用局限性，其里面包括对IL-2的中间体将控制能力增高。此外，肝炎病人里面的现象CD4+T巨噬细胞可能对调节更具抵抗性，表现为现象T巨噬细胞的可抑制减慢速，连续性产生的Treg和基底外产生的正向Treg，以及选择性漫长的CD4+T巨噬细胞里面IL-2中间体将减慢速。本深入研究的目的是叙述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群却是快速速重大突破者里面的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以老年人为基础的垂直深入研究，在21岁以下确诊的病人亲属里面检查1型式肝炎的危险环境因素。我们早先叙述了长期快速速重大突破者的基本特征，他们保持多重口内自身抗基底中性超过10年，但很难出新现肝炎的病理疼痛，慢速性或非透过性神经性。随后，10名继续保持无肝炎并想要提供大量血液抽取的快速速重大突破者纳入T和B巨噬细胞功用分析方法。在迄今的深入研究里面，8名慢速重大突破者(SP组成员)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的口内自身抗基底中性。所有的发起者都属于1型式肝炎重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗基底对某些选择性的中性中间体将，然而，一名病人已经属于2期多于6年，但很难出新现病理疼痛，一名病人被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法里面对该供基底透过了另行评估。受控外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，选用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞可抑制试验评估供基底里面Treg的kHz、表观式和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和重回)透过无都由聚类分析方法，评估Treg表观式。

结果：与肥胖供基底相对来说，来自慢速重大突破基底的思绪CD4+T巨噬细胞的都由聚类辨识，正向的思绪CD4+ TregkHz降低，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)表述降低有关。一名HbA1c增高的病人与重大突破快速速者和也就是说的印证组成员相对来说，Treg谱有所不同。功用分析方法确实，与肥胖供基底相对来说，来自快速速重大突破基底的Treg介导的CD4+现象T巨噬细胞可抑制明显受损。表现为对现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的可抑制降低。

左图1 了解的表观式分析方法辨识，CD4+Treg免疫球蛋白式在慢速重大突破队列里面降低。由FlowSOM匹配成的Treg三楼，聚集在来自所有供基底的来时CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物表述核对出新10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;新线程Treg_1;新线程Treg_2;新线程Treg_3;和新线程Treg_4。(a)运用于9个不同Treg上面匹配成的10个元簇的MST。每个路由值得一提的是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由组成员周围上色。每个路由里面的饼左图指出单个上面的表述级别。(b)每个元聚类的热左图，以辨识整基底上面表述。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)匹配成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对丰度为每个metacluster装入新线左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:新线程Treg_2 (e),新线程Treg_3 (f),新线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。粉红色白点值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩鉴定。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的预测模型式证实，TregkHz的降低是重大突破快速速的标志。分级去却是化(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP发起者和也就是说的HD发起者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相似之处。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的值得一提的是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述透过受控，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及供基底SP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的kHz摘要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去却是化集合的装入新线左图;(c) HLA-DRloGITR−(新线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(新线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(新线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+新线程T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出新的簇被识别为SP和HD队列彼此间的不同。(j)装入新线左图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对丰度(%-)。(k)直方左图辨识每个簇的表观式(粉红色)和Treg上面相对表述与背景表述(深蓝色);上列，新线程Treg_3;示意图动身，新线程Treg_4。背景与所有其他簇里面上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩鉴定

左图3 与肥胖献血者相对来说，重大突破快速速者思绪treg的GITR降低。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;新线程Treg_2;新线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热左图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表述组成员合成，辨识直方左图(c)和摘要左图(d)。Wilcoxon一组符号秩和鉴定，p< 0.07(粉红色)所有供基底包括，p< 0.05(深蓝色)供基底SP 606和也就是说的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表述，从分级去却是化，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)组成员合成，辨识直方左图(e)和摘要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩鉴定

左图4 来自快速速重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制现象CD4+T巨噬细胞的控制能力增高。SP组成员用深蓝色的新线和白点指出，HD组成员用黑色的新线和白点指出，粉红色的新线/白点指出供基底sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按注意到的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠来时化巨噬细胞，培养出新来3同月透过流式巨噬细胞奥义样品。(a-d)与CD4+接收者者相对应将的treg培养出新来(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出新来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。运用于中性印证(正向的组成员织起来巨噬细胞不含treg)测算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 现象CD4+T巨噬细胞对快速速重大突破的T巨噬细胞来时化的可抑制更引人注目。SP组成员用深蓝色的新线和白点指出，HD组成员用黑色的新线和白点指出，粉红色的新线/白点指出供基底sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按注意到的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠来时化巨噬细胞，培养出新来3同月透过流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬介导分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者合作培养出新来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制调升(b)。(c,d) CD25可抑制调升(c)和CD134可抑制调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计里面的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出新的结论是，来自快速速重大突破子的来时化思绪CD4+Treg在GITR表述里面得不到了扩展和多样，凸显了有利于深入研究Treg在1型式肝炎风险个基底里面的表型的必要。

文中出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28